ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG DES TESTS
Malaria ist eine durch Mücken übertragene, hämolytische, fieberhafte Krankheit, die über 200 Millionen Menschen infiziert und mehr als 1 Million Menschen pro Jahr tötet.Es wird durch vier Arten von Plasmodium verursacht: P. falciparum, P. vivax, P. ovale und P. malariae.Diese Plasmodien infizieren und zerstören alle menschliche Erythrozyten und verursachen Schüttelfrost, Fieber, Anämie und Splenomegalie.P. falciparum verursacht schwerwiegendere Erkrankungen als die anderen Plasmodienarten und ist für die meisten Todesfälle durch Malaria verantwortlich.P. falciparum und P. vivax sind die häufigsten Krankheitserreger, es gibt jedoch erhebliche geografische Unterschiede in der Artenverteilung.
Traditionell wird Malaria durch den Nachweis der Organismen auf mit Giemsa gefärbten dicken Ausstrichen peripheren Blutes diagnostiziert, und die verschiedenen Plasmodiumarten werden durch ihr Auftreten in infizierten Erythrozyten unterschieden1.Die Technik ermöglicht eine genaue und zuverlässige Diagnose, allerdings nur, wenn sie von erfahrenen Mikroskopikern unter Verwendung definierter Protokolle2 durchgeführt wird, was für die abgelegenen und armen Gebiete der Welt große Hindernisse darstellt.
Das Malaria-Pf/Pan-Antigen-Schnelltestkit wurde zur Lösung dieser Hindernisse entwickelt.Der Test nutzt ein Paar monoklonaler und polyklonaler Antikörper gegen das P. falciparum-spezifische Protein, das Histidin-Repeat-Protein II (pHRP-II), und ein Paar monoklonale Antikörper gegen Plasmodium-Laktatdehydrogenase (pLDH), ein Protein, das von den vier Plasmodium-Arten produziert wird, und ermöglicht so den gleichzeitigen Nachweis und die Differenzierung der Infektion mit P. falciparum und/oder einem der anderen drei Plasmodien.Sie kann von ungeschultem oder nur gering qualifiziertem Personal ohne Laborausrüstung durchgeführt werden.
PRINZIP
Das Pf/Pan-Malaria-Schnelltestkit ist ein Lateral-Flow-Chromatographie-Immunoassay.Die Bestandteile des Teststreifens bestehen aus: 1) einem burgunderfarbenen Konjugatpad, das mit kolloidalem Gold konjugierte Maus-Anti-pHRP-II-Antikörper (pHRP II-Gold-Konjugate) und mit kolloidalem Gold konjugierte Maus-Anti-pLDH-Antikörper (pLDH-Gold-Konjugate) enthält.
2) ein Nitrozellulosemembranstreifen, der zwei Testbanden (Pan- und Pv-Banden) und eine Kontrollbande (C-Bande) enthält.Die Pan-Bande ist mit monoklonalen Anti-pLDH-Antikörpern vorbeschichtet, mit denen die Infektion mit einer der vier Plasmodienarten nachgewiesen werden kann, die Pf-Bande ist mit polyklonalen Anti-pHRP-II-Antikörpern zum Nachweis einer Pf-Infektion vorbeschichtet und die C-Bande ist mit Ziegen-Anti-Maus-IgG beschichtet.
Während des Tests wird ein ausreichendes Volumen der Blutprobe in die Probenvertiefung (S) der Testkassette gegeben und ein Lysepuffer in die Puffervertiefung (B) gegeben.Der Puffer enthält ein Detergens, das die roten Blutkörperchen lysiert und verschiedene Plasmodium-Antigene freisetzt, die durch Kapillarwirkung über den in der Kassette enthaltenen Streifen wandern.Wenn pHRP-II in der Probe vorhanden ist, bindet es an die pHRP II-Gold-Konjugate.Der Immunkomplex wird dann von den vorbeschichteten Anti-pHRPII-Antikörpern auf der Membran eingefangen und bildet eine burgunderrote Pf-Bande, die auf ein Pf-positives Testergebnis hinweist.Wenn pLDH in der Probe vorhanden ist, bindet es an die pLDH-Goldkonjugate.Der Immunkomplex wird dann vom vorbeschichteten Anti-pLDH-Antikörper auf der Membran eingefangen und bildet eine burgunderfarbene Pan-Bande, die auf ein Plasmodium-positives Testergebnis hinweist.Liegt keine Pan-Bande vor, kann ein positives Testergebnis für eines der anderen drei Plasmodien empfohlen werden.
Das Fehlen jeglicher Testbanden (Pan und Pf) deutet auf ein negatives Ergebnis hin.Der Test enthält eine interne Kontrolle (C-Bande), die unabhängig von der Farbentwicklung auf einer der Testbanden eine burgunderfarbene Bande des Immunkomplexes aus Ziege-Anti-Maus-IgG/Maus-IgG (pHRP-II- und pLDH-Gold-Konjugate) aufweisen sollte.Andernfalls ist das Testergebnis ungültig und die Probe muss mit einem anderen Gerät erneut getestet werden.
